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PCR反應技術引物長度
日期：2025-05-01 14:37
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摘要：
一般引物長度為18~30堿基?？偟恼f來，決定引物退火溫度zui 重要的因素就是引物的長度。引物的退火溫度一般選擇引物的（Tm值-5℃），有的直接用Tm值。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。
在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃
在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃
另外有許多軟件也可以對退火溫度進行計算，其計算原理會各有不同，因此有時計算出的數(shù)值可能會有少量差距。為了優(yōu)化PCR反應，使用確保退火溫度不低于...
一般引物長度為18~30堿基?？偟恼f來，決定引物退火溫度zui 重要的因素就是引物的長度。引物的退火溫度一般選擇引物的（Tm值-5℃），有的直接用Tm值。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。
在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃
在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃
另外有許多軟件也可以對退火溫度進行計算，其計算原理會各有不同，因此有時計算出的數(shù)值可能會有少量差距。為了優(yōu)化PCR反應，使用確保退火溫度不低于54℃的zui短的引物可獲得zui好的效率和特異性。
總的說來，每增加一個核苷酸，引物特異性提高4倍，這樣，大多數(shù)應用的zui短引物長度為18個核苷酸。引物長度的上限并不很重要，主要與反應效率有關。由于熵的原因，引物越長，它退火結合到靶DNA上形成供DNA聚合酶結合的穩(wěn)定雙鏈模板的速率越小。
在利用軟件設計引物的時候，可以通過TM值反過來決定引物的長度，特別是熒光定量PCR的引物，要控制TM=60℃左右。